中国药品检验标准操作规程2010版 微生物限度检查法

导读:中国药品检验标准操作规程2010版微生物限度检查法,被检培养基同法操作,则判断该培养基的适用性检查符合规定,4控制菌检查用培养基适用性检查,控制菌检查用成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配置的培养基均应检查,检查项目包括培养基的促生长、指示和抑制特性能力,4.1计数培养基适用性检查试验用菌株大肠埃希菌(Escherichiacoli),金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureu

中国药品检验标准操作规程2010版  微生物限度检查法

中国药品检验标准操作规程2010版 微生物限度检查法

3.2.3 玫瑰红钠琼脂培养基取5个无菌平皿,分别接种白色念珠菌、黑曲霉菌各2皿;每皿接种1ml菌液(含菌50~100cfu),另一平皿不接种菌作为空白对照,倾注对照玫瑰红钠琼脂培养基,混匀,凝固后于倒置培养72h,计数;被检培养基同法操作。

3.2.4 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基取3个无菌平皿,分别接种白色念珠菌2皿,每皿接种1ml菌液(含菌50~100cfu),另一平皿不接种菌作为空白对照,倾注对照酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基,混匀,凝固后倒置培养72h,计数;被检培养基同法操作。

3.3 结果判断

若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%,且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致,则判断该培养基的适用性检查符合规定。

4 控制菌检查用培养基适用性检查

控制菌检查用成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配置的培养基均应检查。检查项目包括培养基的促生长、指示和抑制特性能力。

4.1 计数培养基适用性检查试验用菌株 大肠埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(B) 44102]

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B) 26003] 乙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi B)[CMCC(B) 50094] 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B) 10104] 生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[CMCC(B) 64941] 白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F) 98001] 菌株的培养及菌液制备同微生物限度检查方法验证。 4.2 各种培养基需要测试的能力及判断指标

液体培养基促生长能力检查:取不大于100cfu的试验菌分别接种于被检培养基和对照培养基中,在相应控制菌检查规定的培养温度(30~35℃)及最短培养基时间下培养。增菌培养基多为澄清液体培养基,与对照培养基比较,被检培养基中试验菌应生长良好,表现为液体培养基变浑浊。

固体培养基促生长能力检查:取试验菌液0.1ml(含菌数50~100cfu)分别涂布于被检培养基和对照培养基上,在相应控制菌检查规定的培养温度(30~35℃)及最短培养基时间下培养。

与对照培养基比较,被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。

液体培养基指示能力检查:取不大于100cfu的试验菌分别接种于被检培养基和对照培养基中,在相应控制菌检查规定的培养温度(30~35℃)及最短培养基时间下培养。与对照培养基管比较,被检培养基中试验菌应生长情况/指示剂反应等应与对照培养基一致。

第41页,共47页

中国药品检验标准操作规程2010版 微生物限度检查法

固体养基指示能力检查:取试验菌液0.1ml(含菌不大于100cfu)分别涂布于被检培养基和对照培养基上,在相应控制菌检查规定的培养温度(30~35℃)及培养基时间下培养。被检培养基上试验菌的茵落形态特征、菌落颜色及指示剂反应情况应与对照培养基一致。

培养基抑制能力检查:取不大于100cfu的试验菌分别接种于液体被检培养基和对照培养基,取试验菌0.1ml液(不大于100cfu)分别涂布于固体被检培养基和对照培养基,在相应控制菌检查规定的培养温度(30~35℃)及最长培养基时间下培养,试验菌应不得生长。

4.3 控制菌检查用培养基能力测试列表(表7)

控制菌检查涉及的21种培养基,特点各异。表格中概述培养基检查的具体项目,具体操作程序在其后说明。

表7 控制菌检查用培养基适用性检查项目、菌株及判断指标

培养基 胆盐乳糖培养基 测试菌株 大肠埃希菌 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 MUG培养基 大肠埃希菌 大肠埃希菌 大肠埃希菌 曙红亚甲蓝琼脂 或麦康凯琼脂 乙型副伤寒沙门菌 大肠埃希菌 乙型副伤寒沙门菌 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 大肠埃希菌 乙型副伤寒沙门菌 金黄色葡萄球菌 乙型副伤寒沙门菌 金黄色葡萄球菌 乙型副伤寒沙门菌 乙型副伤寒沙门菌 铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 铜绿假单胞菌 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 测试特性 促生长能力 抑制能力 促生长能力 指示能力 促生长能力 指示能力 促生长能力 抑制能力 促生长能力 指示能力 促生长能力 促生长能力 促生长能力 抑制能力 促生长能力 指示能力 促生长能力 抑制能力 促生长能力 指示能力 促生长能力 抑制能力 促生长能力 指示能力 抑制能力 测试指标 浑浊 浑浊 未见浑浊 浑浊 366nm有荧光 回收率 回收率 颜色形态同对照 颜色形态同对照 浑浊产气 未见浑浊 浑浊 产气 浑浊 浑浊 上清浑浊 上清未见浑浊 回收率 颜色形态同对照 回收率 不得生长 回收率 颜色形态同对照 浑浊 未见浑浊 回收率 颜色形态同对照 不得生长 乳糖胆盐发酵管 乳糖发酵培养基 营养肉汤 四硫磺酸钠亮绿培养基 胆盐硫乳琼脂 或沙门、志贺属琼脂 溴化十六烷基三甲铵 琼脂 绿脓菌素测定用培养基 亚碲酸盐肉汤培养基 卵黄氯化钠琼脂或 甘露醇氯化钠琼脂 第42页,共47页

中国药品检验标准操作规程2010版 微生物限度检查法

培养基 梭菌增菌培养基 哥伦比亚琼脂 沙氏葡萄糖肉汤 沙氏葡萄糖琼脂 测试菌株 生孢梭菌 生孢梭菌 白色念珠菌 白色念珠菌 白色念珠菌 白色念珠菌 念珠菌显色培养基 1%聚山梨醋80-玉米 琼脂培养物 白色念珠菌 白色念珠菌 白色念珠菌 白色念珠菌 4.4 各控制菌检查用培养基适用性检查实验操作

控制菌检查用培养基数量较多,特点各不相同。为了避免培养基配制过程出现遗漏,此处特别提示以下几个需要特殊注意到培养基:

不可高压灭菌只能加热煮沸灭菌的培养基3种:DHL琼脂、SS琼脂和念珠菌显色培养基; 需要添加试剂的培养基3种:TTB培养基、亚碲酸盐肉汤和哥伦比亚琼脂培养基。 以下叙述各培养基适用性检查的具体操作过程:

4.4.1 胆盐乳糖培养基 新鲜配制100ml/瓶的对照胆盐乳糖培养基4瓶,121℃灭菌15min。备用。分别接种大肠埃希菌、铜绿假单胞菌以及金黄色葡萄球菌各1瓶,接种菌液量1ml(不大于100cfu),另一瓶不接种菌作为空白对照;被检培养基同法操作,置规定温度培养。培养18小时,与对照培养基比较,被检培养基中试验菌应生长良好,表现为液体培养基变浑浊;培养48小时,空白培养瓶和接种金黄色葡萄球菌的培养瓶应不得浑浊;

4.4.2 MUG培养基新鲜配制5ml/支的对照MUG培养基,121℃灭菌15min,备用。取3支,接种大肠埃希菌2支,接种菌液0.2ml(不大于100cfu),另一支不接种菌作为空白对照,培养5小时。在366nm紫外光灯下观察结果;被检培养基同法操作,置规定温度培养。空白培养管应不得浑浊,且366nm处观察无荧光;与对照培养基比较,被检培养基中试验菌应生长良好,表现为液体培养基变浑浊,366nm处应呈现荧光。若荧光不明显,则可延长至24h观察。

4.4.3 曙红亚甲蓝琼脂培养基(EMB) 新鲜配制对照EMB琼脂培养基,121℃灭菌15min,冷却至60℃倾注平皿,35℃培养箱预培8h后备用。取5个无菌EMB琼脂平板,分别涂布接种大肠埃希菌和乙型副伤寒沙门菌各2皿,接种菌液0.1ml(含菌50~100cfu),另一平板不接种菌作为空白对照,涂布均匀后于规定温度倒置培养;被检培养基同法操作。培养18h,被检培养基菌落大小、形态特征及颜色应与对照培养基上的菌落一致;培养24h,空白平板应无菌落生长。

第43页,共47页

测试特性 促生长能力 促生长能力 促生长能力 促生长能力 指示能力 促生长能力 指示能力 抑制能力 促生长能力 指示能力 测试指标 浑浊 回收率 浑浊 回收率 颜色形态同对照 回收率 颜色形态同对照 不得生长 回收率 颜色形态同对照 中国药品检验标准操作规程2010版 微生物限度检查法

4.4.4 麦康凯琼脂培养基 新鲜配制对照麦康凯琼脂培养基,121℃灭菌15min,冷却至60℃倾注平皿,35℃培养箱预培8h后备用。取5个无菌麦康凯琼脂平板,分别涂布接种大肠埃希菌和乙型副伤寒沙门菌各5皿,接种菌液0.1ml(含菌50~100cfu),另一平板不接种菌作为空白对照,涂布均匀后于规定温度倒置培养;被检培养基同法操作。培养18小时,被检培养基菌落大小、形态特征及颜色应与对照培养基上的菌落一致;培养24小时,空白平板应无菌落生长。

4.4.5 乳糖胆盐发酵培养基 新鲜配制10m/支的对照胆盐乳糖培养基,121℃灭菌15min,备用。取5支,分别接种大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌,各2支,接种菌液1ml(不大于100cfu),另一支不接种菌作为空白对照;被检培养基同法操作,置规定温度培养。培养18h,与对照培养基比较,被检培养基中试验菌应生长良好,表现为液体培养基变色、浑浊,且倒管中应有明显的产气现象;培养24h,空白培养管和接种金黄色葡萄球菌的培养管应不得变色、不得浑浊。

4.4.6 乳糖发酵培养基 新鲜配制10ml/支的对照乳糖发酵培养基,121℃灭菌15min,备用。取3支,接种大肠埃希菌2支,接种菌液1ml(不大于100cfu),另一支不接种菌作为空白对照;被检培养基同法操作,置规定温度培养。培养18h,与对照培养基比较.被检培养基中试验菌应生长良好,表现为液体培养基变色、浑浊,且有导管中应有明显的产气现象;培养24h,空白培养管应不得变色、不得浑浊。

4.4.7 营养肉汤培养基 新鲜配制100ml/瓶的对照营养肉汤培养基3瓶,121℃灭菌15min,备用。分别接种乙型副伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌各1瓶,接种菌液1ml(不大于100cfu),另一瓶不接种菌株作为空白对照;被检培养基同法操作,置规定温度培养。培养18h,与对照培养基比较,被检培养基中试验菌应生长良好,表现为液体培养基变浑浊;培养48h,空白培养瓶应不得浑浊。

4.4.8 四硫磺酸钠亮绿培养基(TTB) 新鲜配制10ml/支的对照TTB培养基基础,121℃灭菌15min,备用。临用前,无菌操作加入0.2ml碘试液和0.lml亮绿试液。取5支,分别接种乙型副伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌各2支,接种菌液1ml(不大于100cfu),另一支不接种菌作为空白对照;被检培养基同法操作,置规定温度培养。培养18h,与对照培养基比较,被检培养基中试验菌应生长良好,表现为液体培养基上清浑浊;培养24h,空白的培养管和接种金黄色葡萄球菌的培养管应不得浑浊。

由于TTB中的碳酸钙对浑浊现象观察有影响,因此若浑浊现象不明显,则将各培养物接种至胆盐硫乳琼脂(DHL)或沙门、志贺属琼脂(SS)平板上划线观察TTB培养物生长情况,空白对照和接种金黄色葡萄球菌的培养管划线后应无菌落生长,对照和被检TTB培养基划线接种至琼脂平板后应有菌落生长,且颜色形态一致。

4.4.9 胆盐硫乳琼脂培养基(DHL) 新鲜配制对照DHL琼脂培养基,加热充分溶解,冷却至60℃倾注平皿,35℃培养箱预培8h后备用。取3个无菌DHL琼脂平板,涂布接种乙型副伤寒沙门菌2皿,

第44页,共47页

中国药品检验标准操作规程2010版 微生物限度检查法

接种菌液0.1ml(含菌50~100cfu),另一平板不接种菌作为空白对照,涂布均匀后于规定温度倒置培养;被检培养基同法操作。培养18h,被检培养基菌落大小、形态特征及颜色应与对照培养基上的菌落一致;培养48h,空白平板应无菌落生长。

4.4.10 沙门、志贺属琼脂培养基(SS) 新鲜配制对照SS琼脂培养基,加热充分溶解,冷却至60℃倾注平皿,35℃培养箱预培8h后备用。取3个无菌SS琼脂平板,涂布接种乙型副伤寒沙门菌2皿,接种菌液0.1ml(含菌50~100cfu),另一平板不接种菌作为空白对照,涂布均匀后于规定温度倒置培养;被检培养基同法操作。培养18h,被检培养基菌落大小、形态特征及颜色应与对照培养基上的菌落一致;培养48h,空白平板应无菌落生长。

4.4.11 溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基基础 新鲜配制对照溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基,121℃灭菌15min,冷却至60℃倾注平皿,35℃培养箱预培8h后备用。取7个无菌琼脂平板,分别涂布接种铜绿假单胞菌和大肠埃希菌各3皿,接种菌液0.1ml(含菌50~100cfu),另一平板不接种菌作为空白对照,涂布均匀后于规定温度倒置培养;被检培养基同法操作。培养18h,被检培养基菌落大小、形态特征及颜色应与对照培养基上的菌落一致;培养24h,空白平板和接种大肠埃希菌的平板应无菌落生长。

4.4.12 绿脓菌素测定用培养基(PDP) 新鲜配制对照绿脓菌素测定用培养基基础,每升培养基中加入10ml甘油,121℃灭菌15min,冷却至60℃倾注平皿,35℃培养箱预培8h后备用。取3个无菌绿脓菌素测定用琼脂平板,涂布接种铜绿假单胞菌2皿,接种菌液0.1ml(含菌50~100cfu),另一平板不接种菌作为空白对照,涂布均匀后于规定温度倒置培养24h;被检培养基同法操作。空白平板应无菌落生长,被检培养基菌落大小、形态特征及颜色应与对照培养基上的菌落一致。

4.4.13 亚碲酸盐肉汤培养基 新鲜配制100ml/瓶的对照营养肉汤培养基3瓶,121℃灭菌15min,备用。临用加入新鲜配制的无菌1%亚碲酸盐0.2ml。分别接种金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌各1瓶,接种菌液1ml(不大于100cfu),另一瓶不接种菌株作为空白对照;被检培养基同法操作,置规定温度培养。培养18h,与对照培养基比较,被检培养基中试验菌应生长良好,表现为液体培养基变黑、变浑浊;培养48h,空白培养瓶和接种大肠埃希菌的培养瓶应不得浑浊。

4.4.14 卵黄氯化钠琼脂培养基新鲜配制对照卵黄氯化钠琼脂培养基基础,121℃灭菌15min,冷却至60℃,参照2010版《中国药典》比例无菌操作加入10%氯化钠卵黄液,充分振摇后倾注平皿,35℃培养箱预培8h后备用。取5个无菌琼脂平板,分别涂布接种金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌各2皿,接种菌液0.1ml(含菌50~100cfu),另一平板不接种菌作为空白对照,涂布均匀后于规定温度倒置培养;被检培养基同法操作。培养24h,被检培养基菌落大小、形态特征及颜色应与对照培养基上的菌落一致;培养72h,空白平板和接种大肠埃希菌的平板应无菌落生长。

第45页,共47页

五星文库wxphp.com包含总结汇报、办公文档、文档下载、IT计算机、计划方案、党团工作、教学研究、外语学习、旅游景点、工作范文、教程攻略以及中国药品检验标准操作规程2010版 微生物限度检查法等内容。

本文共10页1<<678910