维生素AD胶丸中维生素A的含量测定

导读:维生素AD胶丸中维生素A的效价测定,维生素A的结构为具有一个共轭多烯醇侧链的环己烷,其醋酸酯比维生素A稳定,维生素A及其制剂除需密封在凉暗处保存外,维生素A与氯仿、乙醚、环己烷或石油醚能任意混合,掌握UV三点校正法的原理和维生素A效价测定的方法,维生素A胶丸(规格2.5万单位/粒),再计算含量,各波长处的吸收度是维生素A与杂质吸收度的代数和,1胶丸内容物平均重量的测定,2供试品溶液的制备与测定

维生素AD胶丸中维生素A的含量测定

维生素AD胶丸中维生素A的效价测定

维生素A的结构为具有一个共轭多烯醇侧链的环己烷,由于其中有多个不饱和键,性质不稳定,易被空气中氧或氧化剂氧化,易被紫外光裂解,并且其对酸不稳定。其醋酸酯比维生素A稳定,临床使用一般将本品或棕榈酸酯溶于植物油中应用。因此,维生素A及其制剂除需密封在凉暗处保存外,还需充氮或加入合适的抗氧剂。维生素A与氯仿、乙醚、环己烷或石油醚能任意混合,在乙醇中微溶,在水中不溶

一、实验目的

掌握UV三点校正法的原理和维生素A效价测定的方法。

二、主要仪器和试剂

紫外可见分光光度仪(具扫描功能),分析天平,石英比色皿,25mL容量瓶若干,移液管,注射器,刀片,烧杯若干个,维生素A胶丸(规格2.5万单位/粒),环己烷,乙醚

三、实验原理

本法是在三个波长处测得吸收度,根据校正公式计算吸收度A校正值后,再计算含量,故本法称为“三点校正法”。该原理主要基于:

(1)杂质的无关吸收在310nm~340nm的波长范围内几乎呈一条直线,且随波长的增长吸收度下降。

(2)物质对光吸收呈加和性的原理。即在某一样品的吸收曲线上,各波长处的吸收度是维生素A与杂质吸收度的代数和,因而吸收曲线也是二者的叠加。

四、实验过程

1胶丸内容物平均重量的测定

取胶丸20粒,精密称定,(2.4641g),用注射器将内容物抽出,再用刀片切开丸壳,用乙醚逐个洗涤丸壳三次,置50mL烧杯中,再用乙醚浸洗1~2次,置通风处,使乙醚挥散,精密称定,得总壳重(0.7213g),算出每丸内容物的平均重量。 2供试品溶液的制备与测定 第一法

方法:精密称取一粒维生素AD胶丸内容物(0.0048g),用环己烷溶解并定量稀释成25mL。取0.8mL再用环己烷稀释至25mL,即制成每mL中含9~15单位的溶液。按照分光光度法,分别在300nm,316nm,328nm,340nm,360nm五个波长下测定吸收度。计算各吸收度与波长328 nm处吸收度的比值和波长328 nm处的百分吸光系数(E1m)值。 计算:

⑴ 求E1m :由 A= E1m ×C×L, 求得 E1m =A/(C×L)。 ⑵ 求效价(IU/g):效价系指每克供试品中所含维生素A的国际单位数(IU/g)。 即IU/g= E1m ×1900。

注:1900为维生素A醋酸酯在环己烷溶液中测定时的效价换算因素。由来:维生素A的含量用生物效价即国际单位(IU/g)来表示。维生素A的国际单位规定如下:

1IU=0.344ug维生素A醋酸酯; 1IU=0.300ug维生素A醇。

因此,每1g维生素A醋酸酯相当的国际单位数为:1×106/(0.344ug/IU)=2907000IU

每1g维生素A醇相当的国际单位数为: 1×106/(0.300ug/IU)=3330000IU 因为,换算因子=(IU/g)/ E1m

所以,换算因子(维生素A醋酸酯) =2907000/1530=1900

换算因子(维生素A醇)=3330000/1820=183 ⑶ 求维生素A占标示量的百分含量:

标示 % = (E1m×1900×W)/标示量 ×100%

=(A×D×1900×W)/(W×100×L×标示量)×100%。

式中 A为直接测得的A328或A328(校正); D为供试品的稀释倍数;

1900为维生素A醋酸酯在环己烷溶剂中测定时的换算因素; W为胶丸的平均内容物重量; L为比色池厚度(cm); 标示量为制剂规格(瓶签上注明的每粒胶丸含有的维生素A醋酸酯的国际单位数)。 ⑷ A值的选择

首先计算吸收度比值(即Ai/A328)

① 如果最大吸收波长在326nm~329nm之间,并分别计算5个波长下的差值,均不得超过±0.02时,则不用校正公式计算吸收度,而直接用328nm处测得的吸收度A328求得E1m。 ② 如果最大吸收波长在326nm~329nm之间,并分别计算5个波长下的差值,如有一个或几个超过±0.02,这时应按以下方法判断:

第一法校正公式:A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340)

再按下式计算校正吸收度与实测吸收度的差值对实测吸收度的百分率(d): d =(A328(校正) —A328(测))/ A328(测) ×100%

若A328(校正)与A328的吸收度相差不超过±3.0%,则不用校正吸收度,仍以未经校正的A328求得E1m。

若A328(校正)与A328的吸收度相差在 -15%~-3%之间,则以A328(校正)得E1m。 若A328(校正)与A328的吸收度相差小于-15%或大于+3%,则不能用本法测定,而应用第二法(皂化法)测定含量。(本次试验不做)

③ 如果最大吸收波长不在326nm~329nm之间,也不能用本法测定,而应用第二法(皂化法)测定含量。

第二法(本次试验不做)

方法:精密称取供试品适量(约相当于维生素A总量500单位以上,重量不多于2g),置皂化瓶中,加乙醇30mL与50%(g/g)氢氧化钾溶液3mL,依法皂化后用不含过氧化物的乙醚提取并定量稀释成每1mL中含维生素A为9~15单位的溶液,在300、310、325、334nm波长处测定吸光度,并确定最大吸收波长(应为325nm)。 计算:计算同第一法,换算因子为1830。

第二法校正公式:A325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334

五、讨论:

1、维生素A具有紫外吸收特征,在325nm~328nm的范围内有最大吸收;并且,它能与三氯化锑试剂作用,产生不稳定的蓝色。故可利用这些性质对其进行鉴别和含量测定。

2、维生素A醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法(即代数法)推导而来;维生素A醇的吸收度校正公式是用相似三角形法(几何法或称6/7定位法)推导而来。

3、在应用三点校正法时,除其中一点在最大吸收波长处测定外,其余两点均在最大吸收峰

的两侧进行测定。如果仪器波长精度不准确时,会产生较大误差。因此,在测定前务必要校正波长,并可用全反式维生素A进行测定,比较测定结果和比值是否与对照品相符合,以进一步核对仪器波长是否准确。测定的样品应不得少于两份。 4、本组在对维生素A含量测定实验中出现过一些问题。第一次用一法测定结果不符合规定,按照要求应该用二法测定。但分析原因后,我们重新做了一遍,用一法测定取得了较好结果,所给维生素A含量符合规定。

我们发现第一次实验失败的原因是:①紫外分光光度计出现了问题,波长不准确,从而导致在相应波长下测得的吸收度不准确。可见仪器波长的准确与否在实验中是致关重要的。②整个操作过程没有进行暗室操作,在光照下暴露了较长时间,而维生素A不稳定,见光易变质,所以导致测定含量不准。

另外,在操作中应注意:

①在含量测定时胶壳要尽量洗干净,避免内容物残留,使粒重尽量准确。

②由于所取的样品量非常小,所以用于收集样品的小烧杯一定要用溶剂洗涤多次并合并入容量瓶中,容量瓶口也要冲洗使样品全部转入。

③在测定不同波长下的吸收度时每一次都要用空白液进行调零。

六、思考题:

按下列操作步骤制备供试品溶液,请计算应取胶丸内容物多少g?(已知胶丸内容物平均重量为W)精密称取胶丸内容物X g,置100 ml量瓶中,加环己烷稀释至刻度,摇匀,在精密量取2 ml,置另一25 ml量瓶中,加环己烷稀释至刻度,摇匀,即得(9~15单位·mL-1)。

七、实验实际计算:

1、计算各波长处吸收度与328nm处吸收度比值。 λ(nm) 吸收度比值(Ai/ A328) 300 316 328 340 360

2、计算校正吸收度,并与实测值比较,即求d 3、求(E1m)供 4、求效价(IU/g)供 5、求标示量的百分含量

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