妇产科2009年优秀论文整理 (11)

导读:华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科(△通讯作者)【摘要】目的了解米非司酮药,1.1研究对象所有病例来自2005年9月至2006年9月本院妇产科门诊,网罗和甄选海量优秀医学论文检索,申明:本论文版权归原刊发杂志社所有,米非司酮对早孕绒毛和蜕膜组织中Th1/Th2型细胞因子的影响作者:夏革清吴超英作者单位:430022湖北,华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科(△通讯作者)【摘要】目的了

妇产科2009年优秀论文整理 (11)

米非司酮对早孕绒毛和蜕膜组织中Th1/Th2型细胞因子的影响

作者:夏革清 吴超英 作者单位:430022 湖北,华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科(△通讯作者) 【摘要】 目的 了解米非司酮药物流产局部绒毛、蜕膜组织中Th1/Th2型细胞因子的表达,进一步探讨药物流产发病机制。方法 Th1/Th2型细胞因子分别以IL-2、IFN-γ/IL-4、IL-10为代表,采用原位杂交及免疫组化方法对40例药物流产患者绒毛和蜕膜中IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的表达进行检测(试验组),利用计算机CMIAS系统,表达指标以阳性数密度(N/S)计算,并与40例正常人工流产的绒毛和蜕膜组织比较(对照组)。结果 原位杂交显示试验组绒毛组织IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10分别为0.003+0.001、0.0027+0.0007、0.0+0.0、0.031+0.008,与对照组(0.0027+0.001、0.0028+0.0007、0.0+0.0、0.042+0.011)比较,IL-10有显著差异(P<0.05)。蜕膜组织试验组IL-2、IFN-γ/IL-4、IL-10(0.0+0.0、0.0+0.0/0.029+0.010、 0.028+0.010)与对照组(0.0+0.0、0.0+0.0/0.031+0.005、0.032+0.006)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化结果显示与原位杂交一致。结论 绒毛组织Th1/Th2型细胞因子与流产有关,蜕膜组织Th1/Th2型细胞因子与药物流产无关,绒毛组织Th1/Th2平衡失调是米非司酮导致流产的机制之一。 【关键词】 Th1细胞/Th2细胞 米非司酮 胎盘免疫

Effect of mifepristone on Th1/Th2 cytokines of chorionic villi and decidual tissue in early pregnancy XIA Ge-qing,WU Chao-ying.Department of Obestetrics & Gynecology in Union Hospital of Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430022,China

[Abstract] Objective To investigate the effect of mifepristone on Th1/Th2 cytokines of the chorionic villi and decidual tissue in early pregnancy,thus studying the mechanism of medical abortion induced by mifeprstone in advance.Methods Th1/Th2 cytokines were represented by IL-2,IFN-γ/IL-4,IL-10.The expression of these cytokines in trophoblasts and deciduas were detected by both in situ hybridization and immunohistochemistry assay in 40 medical abortion patients(experiment group),the positive expression of cytokines was represented by number density(N/S)using computer CMIAS.All results were compared with that obtained from vacuum aspiration.Results In experiment group,exepressions of IL-2,IFN-γ/IL-4,IL-10 were 0.003+0.001,0.0025+0.0007,0.0+0.0,0.031+0.008 respectively in trophoblasts,while in control group,they were 0.0027+0.001,0.0028+0.0007,0.0+0.0,0.042+0.011 respectively,there was significant difference between the two groups in IL-10. By immunohistochemistry assay,the same results were found in the two groups in trophoblasts.In deciduas there were no significant differences between the two groups by both in situ hybridization and immunohistochemitry assay.Conclusion The expression of Th1/Th2 cytokines in trophoblasts but not in deciduas was related to medical abortion.Th1/Th2 imbalance in trophoblast may be one of the mechanism of mifepritone inducing medical abortion.

[Key words] Th1/Th2;mifepritone;placenta immune

米非司酮用于早孕期药物流产已有多年的历史,除了其抗孕激素机制外,米非司酮参与免疫调节及与许多免疫因子相互作用的功能正不断被关注[1]。胎盘免疫是妊娠免疫的热点,Th1/Th2平衡与胎盘免疫密切相关,Th平衡受损直接影响母胎屏障功能。米非司酮是否通过影响Th1/Th2细胞因子平衡介导流产发生是本研究的内容。 1 对象和方法

1.1 研究对象 所有病例来自2005年9月至2006年9月本院妇产科门诊,将患者分2组,其中,试验组40例,为自愿要求药物流产者,对照组为要求人工流产者。两组孕妇年

龄19~35岁,孕5~10周,自然受孕,近半年未服用过甾体激素,无并发症及其他合并症的健康妇女,尿妊娠试验阳性,超声提示宫内早孕。孕妇平均年龄[(27.8±0.8)岁vs.(26.5±0.5)岁]及平均孕龄[( 47.8 ±0.75)天 vs.(42.6±0.41)天]两组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。

1.2 取材 试验组:口服米非司酮(上海华联制药厂)总量150 mg,首剂50 mg,于12 h后、第2天早晚及第3天晨7时各服25 mg,1 h后加服米索前列醇(Searly公司,澳大利亚)600 μg来院观察,2 h内组织完整排出者,立即取组织,未完整排出者,立即清宫,取绒毛和蜕膜组织于4%多聚甲醛固定2~4 h,20%蔗糖浸渍,次日于-20 ℃恒冷箱冰冻切片。对照组于人工流产时立即取组织同法处理。

1.3 试剂 地高辛标记Th1/Th2细胞因子探针及SABC免疫组化试剂盒购自武汉博士德公司,抗体效价1∶100。

1.4 方法 原位杂交检测滋养细胞IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10 mRNA表达,冰冻切片,0.01 mol/l PBS浸泡,0.2 mol/L HCl处理,1 μg/ml蛋白酶K消化,0.1 mol/L TEA缓冲液浸泡,预杂交液封闭非特异性位点,每片滴加20 μl杂交液(含40%去离子甲酰胺,10%葡聚糖硫酸酯,1 mg/ml鲑精DNA,4×SSC,地高辛标记探针),湿盒中42 ℃ 杂交16~24 h,2×SSC洗涤3次,DAB显色,细胞浆呈棕黄色即为阳性表达,常规设置阴性对照。免疫组化采用SABC法,操作程序按试剂盒说明。

1.5 统计学分析 计算机CMIAS图像分析,分别读取阳性数密度(单位统计场面积阳性细胞数,N/S),每个统计场面积为881.26 μm2,测定值以均数±标准差(x±s)表示,采用t检验进行统计分析,显著性标准取α=0.05。 2 结果

2.1 IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10在绒毛组织中的表达 原位杂交及免疫组化显示IL-2、IFN-γ、IL-10在滋养细胞内呈阳性表达,IL-4则无明显表达,两组比较,试验组IL-10活性较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),IL-2、IFN-γ两组比较差异无统计学意义(P>0.05),见表1。

2.2 IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10在蜕膜组织中的表达 原位杂交及免疫组化均显示蜕膜组织中有散在IL-4、IL-10阳性表达细胞,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05),未见明显IL-2、IFN-γ表达,见表2。表1 IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10在绒毛组织中的表达表2 IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10在蜕膜组织中的表达 3 讨论

米非司酮配伍米索前列醇用于早孕药物流产已有多年历史,米索前列醇可促进子宫平滑肌的收缩,有利于坏死胚胎、胎盘组织排出,与胚胎死亡无直接关系。所以,药物流产时,米非司酮通过各种途径使胚胎死亡是早孕流产的关键[2,3]。新的研究表明,米非司酮除了与孕激素受体结合从而产生抗孕激素作用外,还与许多免疫分子有关,可直接作用于绒毛滋养细胞,参与胎盘屏障的免疫反应,导致蜕膜、滋养细胞发生变性、坏死,从而胚胎死亡妊娠终止[4]。

胎盘屏障和胎盘免疫是近年研究的热点,Th1/Th2平衡是母胎免疫和母胎屏障的重要调控机制之一。辅助T细胞是一类CD4+、CD8+表达的T细胞亚群,按其分泌细胞因子的不同分为Th0、Th1、Th2三型,Th1介导细胞免疫,以IL-2、IFN-γ、TNF-α为代表,Th2介导体液免疫,分泌IL-4、IL-5、IL-10等,Th0为具有向Th1、Th2分化的潜能细胞[5]。过去认为,Th2型细胞因子有利于正常妊娠,Th1型细胞因子可介导流产的发生,现在Th1/Th2平衡概念使人们从更符合自然个体的角度来理解和探讨妊娠免疫,正常妊娠的维持与Th1/Th2平衡有关,当Th1/Th2平衡破坏,导致妊娠病理产生、流产发生[6,7]。本研

究表明,对照组滋养细胞IL-2、IFN-γ、IL-10表达阳性,蜕膜组织IL-4、IL-10表达阳性,说明Th1/Th2细胞因子与胎盘屏障免疫有关,且滋养细胞与蜕膜组织的免疫表达存在差异。试验组IL-10 mRNA表达显著低于对照组,两组差异显著,IL-2、IFN-γ两组表达无显著差异,即 Th1细胞因子无改变,而Th2细胞因子水平下降,Th1/Th2总体平衡相对向Th1漂移,免疫组化结果与原位杂交一致。说明米非司酮对绒毛滋养细胞Th1型细胞因子无明显影响,但可下调绒毛滋养细胞Th2型细胞因子,从而使Th1/Th2总体平衡破坏,胎盘屏障受损,导致流产的发生。

蜕膜组织Th1/Th2细胞因子的表达以TH2为主,试验组较对照组略下降,两组比较差异无显著性,说明米非司酮参与胎盘屏障免疫调节主要敏感区域为绒毛,蜕膜组织则成为米非司酮免疫作用的相对不敏感区,与自然流产时Th1/Th2细胞因子在绒毛和蜕膜组织中的表达有差异,而蜕膜的不反应也许可以解释药物流产时容易出现蜕膜组织残留、长期出血的情况[4,8,9]。米非司酮对绒毛、蜕膜组织中Th1/Th2细胞因子反应的不同步性是否存在更复杂的调节机制有待进一步研究。

米非司酮用于早孕流产以来,其导致的蜕膜组织残留、长期出血等副作用一直是困扰临床的难题,本研究表明,米非司酮可使绒毛组织中IL-10明显下降,而对蜕膜组织中Th1/Th2细胞因子表达无影响,说明米非司酮对绒毛与蜕膜组织的免疫调节存在明显差异,这种差异在免疫网络其他因子中是否存在目前正在研究中,这也许可以为解决米非司酮药物流产的副作用找到新的有效的突破口。

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【参考文献】

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2 Hausknecht R.Mifepristone and misoprostol for early medical abortion:18 months experience in the United Staates.Contraception,2003,67:463-465.

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